Molekulêre Diagnostics: real-time PCR

Op it stuit, molekulêre diagnostyk meganisme ûntwurpen polymerase chain reaksje (PCR), dat wie de oanset foar de ûntwikkeling fan in grut oantal metoaden fan diagnoaze fan syktes, basearre op it fêststellen fan genetysk materiaal. Foar it útfieren fan real-time PCR brûkend gene fragment (benammen de nucleic soere) fan 'e causative agint, dat is net fûn yn oare yndividuen.

It prinsipe fan PCR is it fermannichfâldigjen fan in bepaalde pathogen DNA fragmint miljoenen kearen troch DNA polymerase yn in spesjale ienheid, oantsjut as de termyske cycler, dat soarget foar in Cyclische werhelling fan 'e temperatuer rezjym foar in opjûne programma.

Diagnoaze PCR makket it mooglik om werhelje in rige amplifications, it hanthavenjen fan de enzyme aktiviteit. Doe't de amplification fynt plak soepel, yn ien syklus it oantal kopyen fan in bepaald stik fan DNA fan it pathogen dûbeljen, nei tritich fytst - hûndert en tsjien. Dat is wêrom PCR wurdt brûkt yn in diagnoaze te bepalen lyts genôch sykteferwekkers, de identifikaasje fan dat is ûnmooglik sûnder it.

Dêrby moat opmurken wurde dat it RNA kin net in sjabloan foar PCR in echte tiid. Dêrom, om te spoaren firale RNA foardat it amplification om DNA korrelearden mei it byhearrende fragmint derfan. De polymerase keten reaksje makket it mooglik om te produsearje DNA en RNA mjitting pathogen. De ynformaasje dus krigen wurdt brûkt foar it folgjen fan de effektiviteit fan terapy brûkt wurdt, en de evaluaasje fan de klinyske prognoaze.

Dêrneist real-time PCR net nedich oanfoljende aksjes mei respekt foar it ûntsiferjen fan de doelgroep DNA of amplicons, dy't tsjinje as in barriêre foar de krekte diagnoaze en liede ta falske resultaten. Dy oanpak makket it mooglik net te brûken e electrophoresis stap, dy't liedt ta in risiko-reduksje produkten fan 'e polymerase chain reaksje. Ek, fanwege it ôfnimmen fan it tal beynfloedzjen mei de agint, ferleget de tiid fan de enkête, it simplifies it proses, ferleget de kâns op flaters. PCR ek kinne jo opjaan it oarspronklike oantal kopyen fan it DNA fan de pathogen yn in klinyske proses om te helpen identifisearjen perioaden fan exacerbations en te nimmen op 'e tiid maatregels te genezen de pasjint.

Hjoed de dei binne der in grut tal amplification metoades fan fixatie yn echte tiid. De meast brûkte ferskate technyken tapassen amplicon korrelearden mei fluorogenic sûnden, de strieling yntinsiteit dêrfan is ôfhinklik fan it sammeljen fan amplicon en fêstlein yn it echte tiid troch middel fan in spesjale apparaat neamd in thermocycler mei in optysk module. It soarget foar in heech nivo fan gefoelichheid fan de analyze. By deselde PCR produkt kin opspoard, tegearre mei in grutte kwantiteit fan troch-produkten, op in stuit by it brûken fan electrophoresis it yn guon gefallen wurdt net opfallen.

By PCR brûkend posityf en negatyf kontrôle fan gebrûk yn it echt tiid. Sa, positive en negative gebrûk yn in stúdzje analysearre as losse gebrûk, in kontrôle sample dêr't wurdt yntrodusearre yn elk sokke stekproef en passearet alle analyze stappen.

Hjoed de dei binne der in grut tal apparaten foar it útfieren fan it polymerase ketting reaksje. Dy befetsje Bio-Rad, Applied Biosystems, Cepheid en Roche. Elk fan harren hat foardielen en neidielen

Dêrby moat opmurken wurde dat de PCR - metoade fan de diagnoaze brûkt yn grutskalige wittenskiplik, ûndersyk en diagnostyske sintrums om 'e wrâld, omdat it jout de mooglikheid om te fieren direkte ynterpretaasje fan' e resultaten.